IIC協議規定，當主機作為接收設備時，主機對最后一個字節不應答，以向發送設備(從設備)標識數據傳送結束。這是因為每次傳輸都應得到應答信號后再進行下一個字節傳送。如果此時接收機應答了，那它就接收的不是最后一個字節了。如果是最后一個字節，第9個時鐘周期發送的是非應答信號(此時發送的不是應答信號就是非應答信號)，最后發送停止信號。

并非每傳輸8位數據之后，都會有ACK信號，有以下3中例外

1. 當從機不能響應從機地址時(例如它正忙于其他事而無法響應IIC總線的操作，或者這個地址沒有對應的從機)，在第9個SCL周期內SDA線沒有拉低，即沒有ACK信號。這時，主機發出一個P信號終止傳輸或者重新發出一個S信號開始新的傳輸。
2. 如果從機接收器在傳輸過程中不能接收更多的數據時，它不會發出ACK信號。這樣，主機就可以意識到這點，從而發出一個P信號終止傳輸或者重新發出一個S信號開始新的傳輸。
3. 主機接收器在接收到最后一個字節后，也不會發出ACK信號。于是，從機發送器釋放SDA線，以允許主機發出P信號結束傳輸。